EO771(小鼠髓样乳腺癌贴壁细胞)

产品描述

种属: 小鼠（Mus musculus）

品系： C57BL/6

组织来源: 乳腺（Mammary gland）

年龄: 未知（Unknown）

性别: 雌性（Female）

细胞形态： 表皮样细胞（Epitheliallike）

生长特性: 贴壁生长（Adherent）

拆包 & 存储

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代

注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养。若来不及解冻，请储存于液氮中（存储于负80度，会降低细胞存活率）

培养瓶中细胞操作步骤

对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 对于贴壁的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温 培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶请立即传代。

3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5%CO₂ 的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5. 将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基, 加入PBS清洗一次。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3 至5分钟（此处为12.5 cm² 培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4. 离心200x g/5 min，去除上清后，取适量的培养基将细胞重悬, 取适量悬液置于新的培养瓶中，并加入新鲜细胞完全培养基至总体积为4mL。

5. 将细胞置于含有5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养。

传代比例：建议 1:2 至 1:4（以培养瓶底面积计算）

培养基换液: 每隔 2至3天。

完全培养基配制

该细胞系培养所用基本培养基为Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), 配置完全培养基时需加入10%FBS，1% Anti-Anti。

使用范围

本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。