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Hi-five昆虫细胞
一、细胞基本属性
细胞货号：wanwu-191
细胞种属：粉纹夜蛾
生长情况：半贴壁
培养条件：Grace’s Insect Medium+10%FBS+1%双抗
培养环境：air, 100%；28℃
二、细胞培养操作
换液周期：2-3天
培养基体积：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法
1. 轻轻吸走培养上清，留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞；
2. 混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清；
3. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
4. 补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项
半贴壁细胞会附着瓶底，但贴壁不紧，轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、细胞冻存操作
冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格：200-300万/ml，1ml每管
冻存方法
1. 离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3. 将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存
4.注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案
收货处理方式
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发货形式 |
T25瓶 |
冻存管 |
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1 |
快递保存温度 |
室温 |
液氮长期保存或-80度3天以内 |
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2 |
初步平衡 |
T25瓶表面消毒后，放28度培养箱平衡复温2h以上 |
无须平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存 |
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3 |
处理方式 |
吸走大部分培养基，留10-12ml培养基，拍照并观察细胞。密度80%以上即可吸走培养基消化传代，若密度低于80%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上 |
37度水浴摇晃尽快融化细胞，直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右，1min为宜，弃上清，沉淀用新鲜培养基重悬后接种到10cm培养皿，显微镜下观察细胞并拍照，24h后换液一次 |
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4 |
接种方式 |
T25传代首次建议1:2传代，即瓶T25传成两瓶 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
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5 |
注意事项 |
若细胞出现漂浮，T25瓶不开封，放至28度培养箱过夜，若细胞贴壁即说明活性正常，按正常操作消化传代即可；若未贴壁，收集细胞培养基离心后，将细胞重悬接种到新的培养瓶中，同时原瓶还贴壁的细胞加培养基继续培养 发货T25瓶装满大约有75ml培养基，可以收集起来，1500rpm离心5min后，取上清4度保存，用于培养细胞，以平稳过渡到客户自己的培养基 |
收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存，以上情况及时反馈 干冰发货的细胞只能在-80保存3天左右，长时间保存会出现活性下降。干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方将不提供免费售后服务
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Tips：
1. 细胞半贴壁圆形或多角形生长，部分悬浮圆形，传代时均可收集培养，换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶，若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞；
2. 该细胞对胰酶比较敏感，胰酶消化后细胞形态会更多梭形，贴壁变紧，传代不建议使用胰酶消化该细胞；
3. 该细胞28度培养，建议27.5-28度之间，超过28度细胞状态会受损无法恢复，低于27度细胞生长速度会变慢，但恢复温度后可以恢复生长。
